Polipeptidų tirpimas
Kiekviena aminorūgštis turi būdingų cheminių savybių, o peptido tirpumas priklauso nuo jo sekos ir modifikacijų. Prieš ištirpinant visus peptidus, rekomenduojame paimti nedidelį kiekį peptido tirpumo tyrimui.
Peptidų tirpinimas yra labai svarbus žingsnis. Netinkamas tirpinimas gali sukelti peptidų praradimą arba eksperimento nesėkmę. Peptidų tirpumas daugiausia priklauso nuo peptido sekos, todėl kurdami peptidą atkreipkite dėmesį. Rekomenduojama, kad peptidų sekoje būtų 20% įkrautų liekanų, kad padidėtų jos tirpumas.
Prieš naudodami, klientai gali vadovautis šiais trimis pagrindiniais principais, kad pasirinktų tinkamą tirpiklį peptidui ištirpinti.
Pirma, pasirinktas tirpiklis turi sugebėti visiškai ištirpinti peptidą; Antra, pasirinktas tirpiklis turi būti suderinamas su eksperimento sąlygomis; Galiausiai, pasirinktas tirpiklis neturi reaguoti su peptidu arba jį skaidyti.
Kol leidžia peptido kiekis, pirmiausia galite ištirpinti nedidelę peptido dalį ir tada ištirpinti visą mėginį. Jei jums reikia atgauti peptidą iš tirpiklio, galite pasirinkti pradinį tirpiklį, kurį lengva pašalinti po liofilizacijos.
Šie patarimai gali padėti ištirpinti peptidus:
Peptidai, turintys mažiau nei 5 aminorūgštis, paprastai tirpsta vandeniniuose tirpaluose, o stipriai hidrofobinės aminorūgštys (W, I, L, F, M, V, Y), išskyrus.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25 % įkrautų aminorūgščių (E, D, K, R, H) iš hidrofilinių peptidų ir kurių sudėtyje yra<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% įkrautos aminorūgštys taip pat gali būti netirpios arba iš dalies tirpios vandenyje. Geriausia iš pradžių peptidą ištirpinti minimaliame stipriame organiniame tirpiklyje, tokiame kaip DMF, ACN, izopropilo alkoholis, etanolis, acto rūgštis, 4-8 M GdnHCl, karbamidas arba DMSO (ne C, W, M sekoje) ir kituose panašiuose organiniuose tirpikliuose. Organinį tirpiklį, kuris tirpdo peptidą, geriausia lašas po lašo į vandeninį tirpalą įlašinti. Jei tirpalas tampa drumstas, gali būti, kad jis pasiekė tirpumo ribą ir nėra prasmės toliau jį tirpinti. Reikėtų pažymėti, kad iš pradžių pasirinktas tirpiklis turi būti suderinamas su eksperimentine sistema.
Hydrophobic amino acid content >75% Stipriai hidrofobiniai peptidai paprastai taip pat netirpūs vandeniniuose tirpaluose. Tokie peptidai taip pat pirmiausia turi būti apdorojami stipriais organiniais tirpikliais (pvz., TFA, skruzdžių rūgštimi), kurie ištirpsta ir gali nusodinti, jei pridedami prie vandeninio tirpalo. Galutiniam peptido tirpalui gali prireikti didelės koncentracijos organinių tirpiklių, kad jis denatūruotų, o organiniai tirpikliai paprastai nenaudojami gyvų ląstelių biologinių funkcijų tyrimams.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Polipeptidų sekos linkusios formuoti perteklinius tarpmolekulinius vandenilio jungčių tinklus ir lengvai formuoti gelius koncentruotuose vandeniniuose tirpaluose. Tokius peptidus galima ištirpinti, kaip aprašyta 3 žingsnyje. Siekiant sumažinti galimas problemas tirpimo metu, klientams rekomenduojama daugiau dėmesio skirti dizainui ir sekai, siekiant pagerinti peptido tirpumą.